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          下載文件詳細資料
            文件名稱: Efficient Inactivation of Symbiotic Nitrogen Fixation Related Genes in Lotus japonicus Using CRISPR-
            公司名稱: PhD Technology LLC
            下載次數: 1430
            文件詳細說明:
           

               對生命現象中各種重要基因功能的研究,經常需要把這些基因在大腸桿菌、酵母等體系中表達并純化蛋白。將所培養的大腸桿菌細胞(2升)離心并用小體積(~25毫升)溶液重懸。通過使用PhD高壓均質機(D-3L),在15000Psi壓力下經過一次破碎,即可達到超過95%以上的破碎率,并且通過外接的冷卻循環系統可以保證菌液在低溫下破碎,更好的保障了目標蛋白的結構及功能的完整性。

          該實驗結果對于我們順利發表文章是非常重要的:(Wang et al., 2016. Efficient Inactivation of Symbiotic Nitrogen Fixation Related Genes in Lotus japonicus Using CRISPR-Cas9. Front. Plant Sci., http://dx.doi.org/10.3389/fpls.2016.01333)。

          同時,在另外一個待發表的課題中,我們利用D-3L高壓均質機,在低溫下破碎萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii),也得到了很高的破碎效率(>95%)。與之相比,超聲法破碎裂解衣藻細胞的效率比較低(經過多次破碎,還有約50%左右的細胞保持了結構的完整),而且耗時較長、且往往伴隨局部過熱現象。

                 綜合比較,研究人員發現,在實驗中通過使用PhD高壓均質機處理多種不同樣品一般都可以較好的破碎效果。 

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